目前實時熒光定量PCR已得到廣泛應(yīng)用，如擴增特異性分析基因定量分析基因分型SNP分析等熒光定量PCR最常用的方法是DNA結(jié)合染料SYBR Green I 的非特異性方法和Taqman水解探針的特異性方法 SYBR Green I 的非特異性方；rtpcr和實時熒光定量pcr區(qū)別如下1所說的PCR應(yīng)該就是最常規(guī)的PCR，以DNA為模板，通過上下游引物，實現(xiàn)DNA的擴增2RTPCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCRreverse transcription，盡管有些資料上說實時熒光定量PCR也real。

Ct=1lg1+Ex*lgX0+lgNlg1+Exn為擴增反應(yīng)的循環(huán)次數(shù)，X0為初始模板量，Ex為擴增效率，N為熒光擴增信號達到閾值強度時擴增產(chǎn)物的量起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線；簡單來說，PCR技術(shù)就是將引物可以與DNA單鏈模板互補配對的一小段DNA寡核苷酸鏈模板dNTPsDNA ploymerase反應(yīng)BufferddH2O等配制成一個反應(yīng)體系，然后按照反應(yīng)所需要的溫度順序進行溫控式執(zhí)行反應(yīng)經(jīng)過數(shù)十個循環(huán)。

rtpcr和實時熒光定量pcr區(qū)別就是過程不同，具體如下RTPCR一般情況下是指反轉(zhuǎn)錄PCR基本操作過程是將所提取的RNA進行反轉(zhuǎn)錄，然后將所獲得的cDNA作為模板，設(shè)計引物進行擴增，是一種檢測基因表達的常用方法實時熒光定量；目前，PCR成為分子生物學(xué)研究必不可少的一部分實時熒光定量PCRQuantitative Realtime PCR技術(shù)，是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對模板進行定量分析的方法該項。

RealtimePCR是在PCR擴增過程中，通過熒光信號，對PCR進程進行實時檢測由于在PCR擴增的指數(shù)時期，模板的Ct值和該模板的起始拷貝數(shù)存在線性關(guān)系，所以成為定量的依據(jù)。

熒光定量pcr的模板是什么意思

熒光定量PCR最早稱TaqMan PCR，后來也叫RealTime PCR，是美國PEPerkin Elmer公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的一般而言，熒光擴增。

熒光pcr法是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法也叫實時熒光定量PCR技術(shù)熒光PCR法技術(shù)原理將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后。

實時熒光定量PCR realtime fluorescence quantitative PCR，RTFQ PCR 是1996 年由美國Applied Biosystems 公司推出的一種新定量試驗技術(shù)，它是通過熒光染料或熒光標記的特異性的探針，對PCR產(chǎn)物進行標記跟蹤，實時在線監(jiān)控反應(yīng)。

RNA分子怎么能作為PCR模板呢PCR的酶是DNA聚合酶，需要用DNA為模板因此需要mRNA逆轉(zhuǎn)錄為cDNA，再以cDNA為模板才能進行PCR反應(yīng)。

實時熒光定量PCR 1996年，實時熒光定量PCR realtime quantitative polymerase chain reaction，Realtime qPCR 由美國Applied Biosystems公司首先推出，所謂Realtime qPCR是指在 PCR反應(yīng)中加入熒光基團 ，通過連續(xù)監(jiān)測熒光信號。

熒光定量pcr的模板是什么材質(zhì)

1、熒光定量PCRRealtime PCR，是指在PCR擴增反應(yīng)體系中加入熒光基團，通過對擴增反應(yīng)中每一個循環(huán)產(chǎn)物熒光信號的實時檢測，最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法以探針法熒光定量PCR為例PCR擴增時在加入一對引物。

2、基于以下的理論1每一個循環(huán)都會擴增一倍 2引物擴增的效率一致 所以，如果結(jié)果X循環(huán)，產(chǎn)物得到了2的X次方如果起始模板只有一半量，那產(chǎn)物就是2的x1次方如果起始模板的量是一倍，那產(chǎn)物就是2的x+1次方，以此類。

3、所以，如果結(jié)果X循環(huán)，產(chǎn)物得到了2的X次方如果起始模板只有一半量，那產(chǎn)物就是2的x1次方如果起始模板的量是一倍，那產(chǎn)物就是2的x+1次方，以此類推只要在產(chǎn)物指數(shù)增加的階段測量擴增曲線，就可以計算出起始。

4、實時就是指每個階段的熒光都有收集，其實現(xiàn)在所有的熒光定量PCR儀器都是實時的熒光定量PCR的英文簡寫是FQPCR，F(xiàn)是熒光的縮寫，Q是定量的縮寫或者寫成是RTPCRRT就是realtime的縮寫做定量PCR的目的是為了了解起始。